TECNICAS INMUNOLOGICAS

Los antígenos presentes en los tejidos y líquidos biológicos se pueden detectar y cuantificar mediante muchas técnicas inmunológicas basadas en la extraordinaria especificidad de las reacciones antígeno-anticuerpo.

Existen diversos métodos basados en procedimientos distintos para visualizar la unión Ag-Ac . Así tenemos:

1. Técnicas de aglutinación. Cuando el antígenos e encuentra unido o formando parte de células, bacterias o partículas, la reacción Ag-Ac se puede detectar y cuantificar por el aglutinado celular o bacteriano formado.

2. Técnicas de fluorescencia y citometría de flujo. Para la realización de estas técnicas el anticuerpo se marca con un fluorocromo detectándose la formación del complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida.

3. Técnicas de radioinmunoensayo. En estas técnicas al anticuerpo se une un isótopo radiactivo siendo posible la cuantificación del complejo Ag-Ac a través de la radiactividad emitida.

4. Cromatografía de afinidad. La especificidad de la unión Ag-Ac puede utilizarse para obtener Acs y Ags puros.

5. Inmunoprecipitación e inmunoblotting. Permite detectar la presencia y cantidad de antígenos y anticuerpos específicos.

AGLUTINACION

Son útiles para la detección de antígenos y anticuerpos. Su fundamento es inducir una agrupación microscópicamente visible de partículas, causada por interacciones antígeno anticuerpo que forman puentes entre ellas.Existen varios tipos de aglutinación en donde se destacan:

AGLUTINACION ACTIVA-: anticuerpos dirigidos contra componentes de las partículas
- (eritrocitos, bacterias). - Un ejemplo de este caso es la determinación de grupos sanguíneos.

AGLUTINACION PASIVA: los anticuerpos se dirigen contra moléculas que se han adherido intencionalmente a
una partícula que actúa como medio de soporte pasivo (látex).
Una variante es la aglutinación pasiva reversa, en donde lo que se detecta es el antígeno
y las partículas están recubiertas por el anticuerpo.


HEMOAGLUTINACION

HEMOAGLUTINACION INDIRECTA.- Estas metodologías son ampliamente utilizadas en el laboratorio clínico para la detección serológica de anticuerpos en diferentes patologías infecciosas.

HEMOAGLUTINACION DIRECTA.-
•La presencia de antígenos en la superficie de los glóbulos rojos se puede detectar por la hemaglutinación producida cuando se añade un antisuero con anticuerpos frente a dichos antígenos.
•Esta técnica se emplea habitualmente para la identificación de los grupos sanguíneos y Rh, para lo cual a la sangre heparinizada se le añaden los antisueros correspondientes: anti- A, anti-B o anti-AB (todos ellos anti-Rh negativos). Habrá aglutinación cuando los glóbulos rojos posean la especificidad del antisuero añadido
•. De igual manera se procede con antisueros anti-Rh para la determinación de los distintos grupos Rh.














INMUNOFLUORESCENCIA

•Es una técnica de laboratorio empleada para identificar anticuerpos o antígenos específicos. La identificación de los anticuerpos por lo general se realiza en la sangre (suero).

•VENTAJAS - Se pueden obtener resultados rápidos. -No es necesario realizar cultivos. -Se puede identificar microorganismos específicos en un grupo mixto. -Determina la identidad de un organismo muerto. -Es sensible.
• DESVENTAJAS -Costos en reactivo y equipo -Debe ser realizado por personal muy especializado. -Los resultados no son 100% específicos (como toda técnica serológica).

•Valores normales
•Los resultados negativos son normales
•Significado de los resultados anormales
•La inmunofluorescencia se emplea generalmente para detectar la presencia y cantidad de anticuerpos antinucleares (AAN), los cuales son anticuerpos que el organismo crea contra sí mismo en algunas enfermedades autoinmunes, como el LES. . Un resultado positivo, en este caso, indica que el sistema inmune del cuerpo ha reconocido el patógeno en algún momento en el pasado.

ENFERMEDADES POR EL CUAL SE PUEDA REALIZAR ESTA PRUEBA

•Fiebre por garrapatas de Colorado
•Glomeruloesclerosis focal y segmentaria
•Mononucleosis infecciosa por CMV
•Mononucleosis infecciosa por EB
•Enfermedad de Lyme
•Enfermedad de Lyme primaria
•Enfermedad de Lyme secundaria
•Enfermedad de Lyme terciaria
•Enfermedad con cambios mínimos
•Pénfigo vulgar
•Fiebre Q (temprana)
•Fiebre Q (tardía)
•Fiebre maculosa de las Montañas Rocosas
















CITOMETRIA DE FLUJO

•Es una técnica de análisis celular que implica medir las características de dispersión de luz y fluorescencia que poseen las células conforme se las hace pasar a través de un rayo de luz. Para su análisis por citometría de flujo, las células deben encontrarse individualmente en suspensión en un fluido.

INFORMACION OBTENIDA POR CITOMETRIA DE FLUJO

•Básicamente podemos obtener los siguientes datos:
•- Tamaño de la célula
•- Complejidad de la membrana celular
•- Con el uso de fluorocromos se puede detectar hasta 3 colores con un mismo laser


RADIO INMUNOENSAYO

•El Radioinmunoensayo (o abreviado RIA del inglés Radioimmunoassay) es un método radioinmunométrico que se basa en la formación específica de los complejos Antígeno-Anticuerpo (Ag-Ac) lo que le dota de una gran especificidad unido a la sensibilidad de los métodos radiológicos. La técnica ha sido prácticamente reemplazada por el método ELISA el cual mide la unión Ag-Ac mediante colorimetrías en lugar de radiometrías
















ELISA

•La técnica ELISA ("Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay" Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas) se basa en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida mediante anticuerpos que directa o indirectamente producen una reacción cuyo producto, por ejemplo un colorante, puede ser medido espectrofotométricamente.
Este método ha tenido una enorme aplicación en todos aquellos campos en los que se precisaba la cuantificación de productos mediante anticuerpos : diagnóstico clínico, detección viral, clasificación de anticuerpos en isotipos, búsqueda de anticuerpos monoclonales, etc..














INMUNODIFUSION RADIAL


La inmunodifusión radial es una técnica de análisis inmunológico de tipo cuantitativo. Se utiliza para detectar la cantidad de anticuerpos IgG, IgM e IgA que hay en el suero de un individuo.La técnica de inmunodifusión radial es lenta y poco sensible ya que necesita mucha cantidad de anticuerpos (o antígeno) para que se formen complejos











INMUNODIFUSION EN GEL

Se enfrentan antígenos y anticuerpos colocándolos en hoyos o pozos circulares adyacentes hechos en la agarosa, para que se formen líneas de precipitación entre ellos.
.











DOBLE DIFUSION

Consiste en poner en una serie de pozos los posibles anticuerpos contra un antígeno determinado. Al difundiisen antígeno y anticuerpo, forman al encontrarse específicamente una banda de precipitado











TEST DE COOMBS

•Definición
•Es una prueba que busca anticuerpos que puedan fijarse a los glóbulos rojos y causar su destrucción prematura (hemólisis).
•Razones por las que se realiza el examen
•Hay dos formas de realizar la prueba de Coombs: directa e indirecta.
•La prueba de Coombs directa se utiliza para detectar anticuerpos que ya se han fijado a la superficie de los glóbulos rojos. Estos anticuerpos algunas veces destruyen los glóbulos rojos y causan anemia. Esta prueba algunas veces se lleva a cabo para diagnosticar la causa de anemia o ictericia.






•La prueba de Coombs indirecta busca anticuerpos circulantes libres contra una serie de glóbulos rojos estandarizados. Esta prueba indirecta sólo se usa rara vez para diagnosticar una afección médica y, con más frecuencia, se utiliza para determinar si una persona podría tener o no una reacción a una transfusión de sangre.

NEFELOMETRIA

La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo..
















INMUNOBLOT

•El Inmunoblot o Western blot es una técnica mediante la cual se separan proteínas por electroforesis en gel de poliacrilamida y después se transfieren electroforéticamente a un papel de nitrocelulosa o una membrana similar, donde son detectadas con anticuerpos que reconocen los antígenos que hay en ellas.











INMUNOPRECIPITACION

La inmuno precipitación es un técnica muy precisa que tiene la ventaja sobre el inmunoblot que no desnaturaliza las proteínas antes de que se produzca la unión del antígeno con el autoanticuerpo, y permite así detectar autoanticuerpos dirigidos contra epítopos conformacionales














INMUNOELECTROFORESIS

•La inmunoelectroforesis es una técnica que se realiza en dos fases. Primero se separa la mezcla de Ags por electroforesis y posteriormente el antígeno que se desea detectar se hace reaccionar con un anticuerpo específico colocado en un pocillo lateral.. En Inmunología clínica, esta técnica puede utilizarse en la identificación de las proteínas de mieloma.